Thomas Reinard Books

Inhaltsverzeichnis 1. Das Leben und seine Bestandteile 12 1.1. Der Aufbau von DNA und RNA 13 1.2. Der genetische Code 15 1.3. Die Gene 16 1.3.1. Die Genstruktur in Prokaryonten 18 1.3.2. Genstruktur in Eukaryonten 19 1.4. Die Proteine 21 1.5. Die Zelle 23 2. Grundlagen der Arbeit im Labor 25 2.1. Wasser 25 2.2. Messung des pH-Wertes 26 2.3. Puffer 27 2.4. Waagen 28 2.5. Mikropipetten 29 2.6. Gefäße im Labor 30 2.7. Zentrifugen 30 2.8. Mischen und Konzentrieren 33 2.9. Konzentrieren 33 2.10. Pufferwechsel 34 2.11. Proben- Lagerung 34 2.12. Steriles Arbeiten 35 2.13. Die kleinen Freunde - Pflege und Aufzucht von Escherichia coli 37 2.13.1. Nährmedien 38 2.13.2. Antibiotika 40 2.13.3. Lagerung von Bakterien 42 2.14. Der Aufschluss von Geweben 43 3. Aufreinigung von Nukleinsäuren 46 3.1. Gegenspieler erfolgreicher DNA- und RNA-Isolationen 46 3.1.1. Nukleasen 47 3.1.2. Scherkräfte 48 3.1.3. Chemische Verunreinigungen 48 3.1.4. EDTA und zweiwertige Ionen: das Yin und Yang der Molekularbiologie 49 3.2. Extraktion von Nukleinsäuren 49 3.2.1. Der Extraktionspuffer 49 3.3. Die weitere Aufreinigung der DNA 51 3.3.1. Phenolextraktion 52 3.3.2. Ethanolfällung 53 3.3.3. Isopropanolfällung 55 3.3.4. PEG Fällung 55 3.3.5. Entfernen von Polysacchariden mit CTAB 55 3.3.6. Silikamatrices 56 3.3.7. Tropfendialyse 57 3.4. Einige ausgewählte DNA- Aufreinigungsmethoden 57 3.4.1. Die Plasmidpräparation aus E. coli 57 3.4.2. Die Isolation von DNA aus Pflanzen mit CTAB 59 3.4.3. Isolation von DNA aus Blut oder Zellkulturen 60 3.4.4. Isolation hochmolekularer DNA 61 3.5. Die Isolation von RNA 61 3.6. Übersicht über den Einsatz von Kits 64

In den vergangenen Jahren hat sich die Molekularbiologie rasant weiterentwickelt. Technologien wie die Modulare Klonierung, PCR-basierte Klonierungen und das Gibson Assembly sind inzwischen in vielen Laboren als Standard etabliert. Neben den modernen Klonierungsverfahren wurden die die Denkansätze in der modernen Biologie revolutionierende Bioinformatik und die synthetische Biologie aufgenommen. Die zunehmende Bedeutung reicht inzwischen weit in die Gesellschaft hinein, wie die „Omics“-Technologien und die Genom Editierung zeigen, die ebenfalls in diesem Buch behandelt werden. Die 3. Auflage wurde korrigiert und aktualisiert und enthält viele hilfreiche Tipps und Tricks, welche die Fehlersuche im Labor erleichtern können. Concept-Maps visualisieren Zusammenhänge zwischen den vorgestellten Methoden. Zahlreiche Abbildungen und Tabellen veranschaulichen komplexe Sachverhalte, „Gut zu wissen“-Boxen liefern Hintergrundinformationen, „Tipp“-Boxen geben wertvolle Hinweise für die praktische Arbeit und Protokolle besonders wichtiger Verfahren erleichtern das Verständnis. Ideal für Studium und Praxis!