Klonierung, rekombinante Expression und Charakterisierung Kohlenhydrat-bindender Antikörper

Kohlenhydrat-bindende Antikörper aus etablierten Hybridomzelllinien werden seit mehreren Dekaden für die Charakterisierung von Glykokonjugaten verwendet. Eine Analyse von Primär- oder Tertiärstrukturen etablierter Antikörper, insbesondere von IgM-Antikörpern, wurde in der Vergangenheit jedoch nur selten durchgeführt. Diese Arbeit befasst sich daher mit der rekombinanten Expression und Charakterisierung von Kohlenhydrat-bindenden Antikörperfragmenten. Analysiert werden Antikörperfragmente, die die bekannten Kohlenhydrat-Epitope Polysialinsäure, Lewis X, HNK-1, Oligomannose, sowie das Tn- und das Tf-Antigen, binden. Dazu wurden zunächst die zugrundeliegenden DNA- und Aminosäure-Sequenzen der variablen Regionen aller bearbeiteten Antikörper identifiziert. Anschließend wurden die variablen Domänen der Antikörper rekombinant in E. coli hergestellt und Bindungsanalysen mit den zugehörigen Antigenen durchgeführt, um die Bindung zu reproduzieren. Abhängig von der Bindestärke kamen dabei sowohl konventionelle Methoden als auch Oberflächen-Plasmon-Resonanzanalysen zum Einsatz. Einige Antikörper-Fragmente konnten zusätzlich kristallisiert und durch Röntgenstrukturanalysen charakterisiert werden.